微生物菌種真空凍干機(jī)是在抽真空的狀態(tài)下讓物質(zhì)在低溫下干燥的設(shè)備，主要用于微生物制劑和生物活性物質(zhì)的干燥。菌種保藏室用來對微生物進(jìn)行真空凍干保藏。微生物冷凍干燥法是長期保藏菌種的較好方法之一。因其便于批量生產(chǎn)、長期保藏成活力高，保藏和運(yùn)輸設(shè)備簡單而成為一種普遍使用的保藏方法，已廣泛應(yīng)用于保存大部分細(xì)菌、真菌和一些病毒。液氮罐

1.安瓿管或凍存管的準(zhǔn)備
   用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管，或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈， 121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。

2.保護(hù)劑的準(zhǔn)備
   保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時，應(yīng)注意其濃度，一般采用10-20%甘油。

3.微生物保藏物的準(zhǔn)備
   微生物不同的生理狀態(tài)對存活率有影響，一般使用靜止期或成熟期培養(yǎng)物。分裝時注意應(yīng)在無菌條件下操作。

4.菌種的準(zhǔn)備可采用下列幾種方法：
   刮取培養(yǎng)物斜面上的孢子或菌體，與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi)；
接種液體培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)后取菌懸液與保護(hù)劑混合分裝于凍存管內(nèi)；
將培養(yǎng)物在平皿培養(yǎng)，形成菌落后，用無菌打孔器從平板上切取一些大小均勻的小塊（直徑約5-10毫米），真菌取菌落邊緣的菌塊，與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi)；
在小安瓿管中裝1.2-2毫升的瓊脂培養(yǎng)基，接種菌種，培養(yǎng)2-10天后，加入保護(hù)劑，待保藏。

5.預(yù)凍
   預(yù)凍時一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結(jié)到-35℃。
目前常用的有三種控溫方法：
—— 程序控溫降溫法，應(yīng)用電子計算機(jī)程序控制降溫裝置，可以穩(wěn)定連續(xù)降溫，能很好地控制降溫速率。
—— 分段降溫法：將菌體在不同溫級的冰箱或液氮罐口分段降溫冷卻，或懸掛于冰的氣霧中逐漸降溫。一般采用二步控溫，將安瓿管或塑料小管，先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小時，然后取出放入液氮罐中快速冷凍。這樣冷凍速率大約每分鐘下降1-1.5℃。
—— 對耐低溫的微生物、可以直接放入氣相或液相氮中。

6.保藏
   將安瓿管或塑料凍存管置于液氮罐中保藏。一般氣相中溫度為-150℃，液相中溫度為-196℃。
保藏周期
一般10年以上。

7.復(fù)蘇方法
   從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)搖動。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

8.適用范圍
   各類微生物。
液氮保藏應(yīng)注意事項
—— 防止凍傷，操作注意安全，帶面罩及皮手套
—— 塑料凍存管一定要擰緊螺帽
—— 運(yùn)送液氮時一定要用專用特制的容器，絕不可用密閉容器存放或運(yùn)輸液氮，切勿使用保溫瓶存放液氮
—— 注意存放液氮容器的室內(nèi)通風(fēng)，防止過量氮?dú)馐谷酥舷?br /> —— 防止安瓿管或塑料凍存管破裂爆炸，如液氮滲入管內(nèi)，當(dāng)從液氮容器取出時，液態(tài)氮體積膨脹約680倍，爆炸力很大，要特別小心 液氮罐
—— 注意觀察液氮容器中液氮的殘存量，定期補(bǔ)充液氮。