1、冷凍越慢越好,復蘇越快越好
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細胞冷凍越慢越好,細胞冷凍前,要有充足的時間;復蘇是相反的,速度越快越好。從液氮罐里取出來之后,迅速放在37℃水浴中,然后使勁搖,讓它盡快融化。
2、細胞凍存和復蘇注意事項
和液氮接觸時,要戴保護眼鏡和手套。因為復蘇過程中搖晃,小瓶有可能會爆炸;還有,凍存液中的DMSO是有毒致癌的。所以接觸的時候一定要帶好手套。
3、凍存細胞數(shù)量要足夠
無論再怎么小心,細胞在冷凍和復蘇過程中總會死掉一批的。所以,一開始凍存細胞的數(shù)量要足夠。
4、做好標記
把培養(yǎng)瓶放入提手,末端應(yīng)該扎有小牌,注明主人的名字,細胞名稱和凍存日期。還要在每個凍存管上寫上細胞名稱,代數(shù)和凍存日期。實驗室的液氮罐都是公用的。每個人應(yīng)該有屬于自己的提手,會為找自己液氮罐省去好多時間。
5、細心照料
復蘇的細胞非常脆弱,需要我們的細心呵護。一切和細胞接觸的動作都要輕柔。
6、DMSO的問題
前面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么,解凍之后,應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢?
是不需要去除的。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細胞外,99%的細胞都不需要去除DMSO。解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的。
7、解凍前后細胞所用物質(zhì)要相同
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因為每一種細胞都有自己特定的,并且已經(jīng)熟悉了的生長環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清,會造成細胞生長不良,甚至死亡。
細胞培養(yǎng)是個費力的事情,要經(jīng)常關(guān)注。要時刻注意培養(yǎng)箱里面的細胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復蘇的技術(shù),就可以解決這個問題。